雙抗夾心ELISA試劑(ji)盒的反應時間

    在(zai)保證(zheng) ELISA 有(you)效檢(jian)測(ce)(ce)病原菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)前提(ti)下，快速、方(fang) 便也是(shi)雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)夾(jia)心(xin) ELISA 的(de)(de)(de)必要條件。雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)夾(jia)心(xin) ELISA 從 加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原到得出(chu)結果，檢(jian)測(ce)(ce)大腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun) O157:H7 共需(xu)(xu) 要 5h 左右(you)，而間接 ELISA 則(ze)需(xu)(xu)要 7h(包(bao)被(bei) 37℃，2h)或(huo) 者 17h(包(bao)被(bei) 4℃guo夜)。本(ben)(ben)論(lun)文篩選出(chu)的(de)(de)(de)雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)夾(jia)心(xin) ELISA 檢(jian)測(ce)(ce)大腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun) O157:H7 省去封(feng)(feng)閉這(zhe)一(yi)步驟。在(zai)間接 ELISA 測(ce)(ce)定(ding)(ding)(ding)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原中(zhong)，封(feng)(feng)閉一(yi)般是(shi)*的(de)(de)(de)，因為包(bao) 被(bei)不(bu)(bu)同(tong)濃度抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原不(bu)(bu)一(yi)定(ding)(ding)(ding)可(ke)(ke)以*覆蓋(gai)固相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面，如 果不(bu)(bu)封(feng)(feng)閉，很可(ke)(ke)能(neng)使(shi)(shi)隨(sui)后加(jia)入(ru)的(de)(de)(de)特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)和(he)(he)酶標二抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang) 直接被(bei)吸(xi)附(fu)到固相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)上(shang)，產(chan)生(sheng)非特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)顯色而使(shi)(shi)檢(jian)測(ce)(ce) 結果偏(pian)高。但是(shi)對(dui)于雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)夾(jia)心(xin) ELISA 來(lai)(lai)說，在(zai)包(bao)被(bei) 捕獲抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)時已(yi)經(jing)使(shi)(shi)固相(xiang)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)飽和(he)(he)，已(yi)經(jing)沒有(you)多余(yu)(yu)的(de)(de)(de)吸(xi)附(fu) 力來(lai)(lai)吸(xi)附(fu)隨(sui)后加(jia)入(ru)的(de)(de)(de)特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)和(he)(he)酶標二抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)，這(zhe)都說明(ming)(ming)(ming) 了雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)夾(jia)心(xin) ELISA 有(you)不(bu)(bu)需(xu)(xu)要封(feng)(feng)閉的(de)(de)(de)可(ke)(ke)能(neng)，通過正(zheng)交試驗 結果也證(zheng)明(ming)(ming)(ming)不(bu)(bu)封(feng)(feng)閉可(ke)(ke)以達到理想實(shi)驗效果，而且(qie)還縮短(duan) 了整個檢(jian)測(ce)(ce)流程和(he)(he)時間，說明(ming)(ming)(ming)只要酶標記(ji)物是(shi)高活(huo)性(xing)的(de)(de)(de) 并且(qie)操作時洗滌*，不(bu)(bu)經(jing)封(feng)(feng)閉也可(ke)(ke)得到滿意結果。雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)夾(jia)心(xin) ELISA 檢(jian)測(ce)(ce)法的(de)(de)(de)特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)和(he)(he)靈敏性(xing) 抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)結合實(shi)際上(shang)只發(fa)生(sheng)在(zai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原決(jue)定(ding)(ding)(ding)簇與抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原結合位點之間，由于兩(liang)(liang)者在(zai)化學結構和(he)(he)空 間構型上(shang)呈(cheng)(cheng)互補(bu)關系，所(suo)以抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)反(fan)應具(ju)有(you)高度的(de)(de)(de)特(te)(te) 異(yi)(yi)性(xing)。但這(zhe)種特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)并不(bu)(bu)是(shi)的(de)(de)(de)，假使(shi)(shi)兩(liang)(liang)種化合物 有(you)著部分相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)結構，在(zai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)反(fan)應中(zhong)可(ke)(ke)能(neng)出(chu)現交叉 反(fan)應。本(ben)(ben)實(shi)驗以大腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun) O157:H7 及(ji)其他菌(jun)(jun)株(zhu)共 10 株(zhu)作 為抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原用來(lai)(lai)檢(jian)測(ce)(ce)本(ben)(ben)方(fang)法的(de)(de)(de)特(te)(te)異(yi)(yi)性(xing)，結果顯示大腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun) O157:H7 呈(cheng)(cheng)明(ming)(ming)(ming)顯陽性(xing)反(fan)應，其余(yu)(yu)各菌(jun)(jun)株(zhu)均呈(cheng)(cheng)陰性(xing)反(fan)應， 說明(ming)(ming)(ming)本(ben)(ben)方(fang)法對(dui)大腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun) O157:H7 具(ju)有(you)明(ming)(ming)(ming)顯的(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)特(te)(te)異(yi)(yi) 性(xing)，而對(dui)所(suo)測(ce)(ce)定(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)其它菌(jun)(jun)株(zhu)無交叉反(fan)應。

    本論文(wen)所(suo)建立的(de)(de)雙抗(kang)(kang)夾心 ELISA 方法(fa)對純培養的(de)(de) 大(da)腸(chang)桿菌 O157:H7 檢(jian)(jian)出限均105CFU/ml，Kerr 和 Chart 等[6]建立的(de)(de)雙抗(kang)(kang)夾心 ELISA 檢(jian)(jian)測大(da)腸(chang)桿菌 O157:H7 的(de)(de)檢(jian)(jian)測限為 10 5 CFU/ml ，趙志晶和劉(liu)秀梅(mei)[7] 建立的(de)(de)雙抗(kang)(kang)夾心ELISA 檢(jian)(jian)測大(da)腸(chang)桿菌 O157:H7 的(de)(de)檢(jian)(jian)測限為 104CFU/ml，兩 者均用單(dan)(dan)克(ke)(ke)隆(long)抗(kang)(kang)體(ti)作為檢(jian)(jian)測抗(kang)(kang)體(ti)，而本方法(fa)使用 IgY 抗(kang)(kang) 體(ti)與兔多(duo)克(ke)(ke)隆(long)抗(kang)(kang)體(ti)，制備相對比單(dan)(dan)克(ke)(ke)隆(long)抗(kang)(kang)體(ti)簡單(dan)(dan)，對試(shi)劑、成本要求也相對降低，其效果(guo)基本達(da)到檢(jian)(jian)測要求。

     我司(si)擁有一(yi)批技術(shu)(shu)*、經驗(yan)豐富的(de)技術(shu)(shu)工(gong)程師(shi)，經過多(duo)年積累，試劑盒(he)現(xian)已涵蓋(gai)種(zhong)屬甚多(duo)，上千余種(zhong)指標，有快速、簡單、準確的(de)特點，迎合(he)了(le)廣大高(gao)(gao)校(xiao)和科研(yan)人(ren)員(yuan)的(de)需求，極大的(de)提高(gao)(gao)了(le)科研(yan)人(ren)員(yuan)的(de)工(gong)作效率，成熟(shu)穩定的(de)質量，贏得(de)了(le)眾多(duo)科研(yan)機(ji)構的(de)認(ren)可，完(wan)善的(de)庫存及(ji)供(gong)(gong)應體系以(yi)及(ji)高(gao)(gao)效穩定的(de)技術(shu)(shu)指導，保證產品均(jun)能現(xian)貨供(gong)(gong)應。