本(ben)試(shi)劑盒僅供研究使用。
檢測范(fan)圍: 96T
15ng/L -500ng/L
使用目的:
本(ben)試劑盒(he)用于(yu)測(ce)定(ding)樣(yang)本(ben)中髓過氧化物(wu)酶-DNA復合物(wu)(MPO-DNA)含量。
實驗原理
本試(shi)劑盒應用雙抗體(ti)夾心法測定標本(ben)中人(ren)髓過氧化物酶-DNA復合物(MPO-DNA)水平。用純化的人髓過氧(yang)化(hua)物酶-DNA復合(he)物(MPO-DNA)抗體包被(bei)(bei)微孔板,制成固相抗體,往包被(bei)(bei)單抗的微孔中依次加入髓(sui)過氧化物酶(mei)-DNA復合(he)物(MPO-DNA),再與HRP標(biao)記(ji)的髓過氧化物(wu)酶-DNA復合物(wu)(MPO-DNA)抗(kang)體結合,形成抗(kang)體-抗原-酶標(biao)抗體(ti)復合物,經過(guo)che底洗滌后加(jia)底物(wu)TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍色,并在(zai)酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)成最(zui)終的(de)黃色。顏色的(de)深淺和樣品(pin)中的(de)髓過氧化物(wu)酶-DNA復合物(MPO-DNA)呈(cheng)正(zheng)相關。用酶標儀在450nm波(bo)長下(xia)測(ce)定吸光度(du)(OD值),通過(guo)標準曲線計(ji)算樣(yang)品中人髓(sui)過氧(yang)化物酶-DNA復合物(MPO-DNA)濃度。
試劑(ji)盒(he)組成(cheng)
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品(960ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液(ye) | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液(ye) | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑(ji)A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本(ben)采集后盡早進行(xing)提(ti)取(qu),提(ti)取(qu)按相關文獻進行(xing),提(ti)取(qu)后應(ying)盡快(kuai)進行(xing)實驗。若(ruo)不能馬上(shang)進行(xing)試驗,可將標本(ben)放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測(ce)含NaN3的樣(yang)品,因NaN3抑(yi)制辣根過氧化物酶(mei)的(HRP)活(huo)性。
操作(zuo)步驟(zou)
1. 標準(zhun)品(pin)的稀釋:本試(shi)劑盒提供(gong)原倍標準(zhun)品(pin)一支,用戶可按(an)照下列圖(tu)表在小試(shi)管中進(jin)行(xing)稀釋。
480ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品(pin)加入(ru)150μl標準品稀釋液 |
240ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標(biao)準(zhun)品加入150μl標準品稀釋液 |
120ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入150μl標準品稀釋液 |
60ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標(biao)準品稀(xi)釋液 |
30ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號(hao)標準品加(jia)入(ru)150μl標準(zhun)品稀(xi)釋液 |
2. 加(jia)樣:分別設空白(bai)孔(kong)(空白(bai)對照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品及(ji)酶標試(shi)劑(ji),其(qi)余各步(bu)操作相同)、標準孔(kong)、待測樣品孔。在酶(mei)標包被(bei)板上標準品準確加樣50μl,待(dai)測樣品孔中先加(jia)樣品稀(xi)釋液40μl,然(ran)后再加待測樣(yang)品10μl(樣品(pin)最終稀釋度為(wei)5倍)。加樣將樣品(pin)加于酶標板孔(kong)底部,盡量不觸及孔(kong)壁,輕輕晃動(dong)混勻。
3. 溫育:用封板膜(mo)封板后置37℃溫育30分(fen)鐘。
4. 配液:將30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液用蒸餾(liu)水30倍稀釋(shi)后備用
5. 洗滌:小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜,棄去液(ye)體(ti),甩干,每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液(ye),靜置(zhi)30秒后棄去,如此重復5次,拍(pai)干。
6. 加酶(mei):每孔加入(ru)酶(mei)標試劑(ji)50μl,空白(bai)孔除外(wai)。
7. 溫(wen)育:操作同3。
8. 洗滌:操(cao)作同5。
9. 顯色(se):每孔先加入顯色(se)劑A50μl,再加入顯色劑(ji)B50μl,輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終(zhong)止:每孔加終(zhong)止液(ye)50μl,終止(zhi)反應(此時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se))。
11. 測定:以(yi)空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(du)(OD值(zhi))。 測定應在加終止液后15分鐘以(yi)內進行。
保存條件(jian)及有效(xiao)期
1.試劑(ji)盒(he)保存(cun):;2-8℃。
2.有效期:6個月