小(xiao)鼠白介素5試劑盒使用(yong)說明書

本試劑盒僅供研究使(shi)用(yong)。

檢測(ce)范圍：                                                          96T

1pg/ml-40pg/ml

使用目(mu)的：

小(xiao)鼠白介素5試劑盒用于測定小鼠血(xue)清、血(xue)漿及相關液體樣本中(zhong)白細胞(bao)介素-5（IL-5）含量。

實驗原(yuan)理

小(xiao)鼠白介素5試(shi)劑(ji)盒應用雙抗體夾(jia)心法測定標本中小鼠(shu)白細胞介素-5（IL-5）水平。用純化的小(xiao)鼠白細胞介(jie)素(su)-5（IL-5）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞(bao)介素-5（IL-5），再與HRP標記的白細胞介素-5（IL-5）抗(kang)體(ti)結合，形成抗(kang)體(ti)-抗原-酶標抗體復合物(wu)，經過*洗滌(di)后加底物(wu)TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素(su)-5（IL-5）呈正(zheng)相關。用酶(mei)標儀在(zai)450nm波長下測定(ding)吸光(guang)度（OD值），通過標準曲(qu)線(xian)計(ji)算(suan)樣品(pin)中小鼠白(bai)細胞介素-5（IL-5）濃(nong)度。

試劑盒(he)組(zu)成

標本要(yao)求

1．標本采集(ji)后盡(jin)早進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按相關文獻進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)，提(ti)(ti)取(qu)后應盡(jin)快進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)實驗。若不(bu)能馬上進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)試驗，可將標本放(fang)于(yu)-20℃保存(cun)，但應避免(mian)反復凍(dong)融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制辣根過氧化(hua)物酶的（HRP）活性。

小(xiao)鼠白介素(su)5試劑盒操作步驟

1.         標準品(pin)(pin)的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品(pin)(pin)一(yi)支，用戶(hu)可按照下列圖表在(zai)小試管中進(jin)行(xing)稀釋。

  2.         加(jia)樣：分別設空白(bai)孔（空白(bai)對照孔不加(jia)樣品及(ji)酶(mei)標試劑，其余各步操作相同）、標準(zhun)孔、待測樣品(pin)孔。在酶(mei)標包(bao)被板上標準品(pin)準確加(jia)樣50μl，待測樣品(pin)孔中先加樣品(pin)稀釋液40μl，然后再加待測(ce)樣品10μl（樣品(pin)zui終稀釋度為5倍）。加(jia)(jia)樣將樣品加(jia)(jia)于酶標板孔底部(bu)，盡量不觸及孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻(yun)。

3.         溫育：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫育30分鐘(zhong)。  

4.         配液：將30倍濃縮(suo)洗(xi)滌液用蒸餾水30倍稀(xi)釋后備用

5.         洗(xi)滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干(gan)，每孔加滿洗(xi)滌液，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復5次，拍干。

6.         加(jia)酶(mei)：每孔加(jia)入酶(mei)標試劑50μl，空白孔(kong)除外。

7.         溫育：操作(zuo)同3。

8.         洗(xi)滌：操作同5。

9.         顯色：每孔(kong)先加入顯色劑(ji)A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔(kong)加(jia)終止液50μl，終止反(fan)應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定(ding)：以(yi)空白空調零，450nm波長依序測量(liang)各孔(kong)的吸光度（OD值）。 測定應在加(jia)終止液后15分(fen)鐘以內進行。

1．試劑盒從冷藏環境中取出應(ying)在室溫平衡(heng)15-30分鐘后(hou)方可使用，酶標(biao)包被板開封后(hou)如未用完，板條應(ying)裝入(ru)密(mi)封袋中保存。

2．濃洗滌液(ye)可能會有結晶析出，稀(xi)釋時(shi)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shi)不影響結果(guo)。

3．各步加樣(yang)均應使(shi)用加樣(yang)器，并經常校對其準(zhun)確性，以避免試驗(yan)誤(wu)差(cha)。一(yi)次加樣(yang)時間控(kong)制(zhi)在5分鐘內，如標本(ben)數量(liang)多，推薦使用排槍加樣。

4．  請每次測定(ding)的(de)同時做標準曲線，做復孔。如標本(ben)(ben)中待測物(wu)質含量過高（樣本(ben)(ben)OD值大于標(biao)準(zhun)品孔*孔的OD值），請(qing)先用樣品稀釋液(ye)稀釋一定(ding)倍數（n倍）后再測定，計(ji)算時(shi)請(qing)zui后乘以總(zong)稀釋(shi)倍數（×n×5）。

5．  封板膜只限一次性使(shi)用，以避免交叉污染(ran)。

6．底(di)物請避(bi)光(guang)保(bao)存。

7．嚴格按照說明書的操(cao)作進行，試(shi)驗結果判(pan)定必(bi)須(xu)以酶標儀讀數(shu)為準.

8．所(suo)有樣(yang)品，洗(xi)滌液和各種廢棄物都(dou)應按傳染(ran)物處理。

9．本試劑(ji)不同批號組分不得混用(yong)。

10. 如(ru)與英文說(shuo)明(ming)書有(you)異，以英文說(shuo)明(ming)書為準。

保存(cun)條件及有效期

1．試劑盒保存(cun)：；2-8℃。

2．有效期：6個月