二核苷酸(CpG)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使(shi)用(yong)說明書
本(ben)試劑(ji)盒(he)僅供研究使用。
使用(yong)目的:
本試劑盒用(yong)于(yu)測定樣本中二核苷(gan)酸(CpG)的含量。
實驗原理
本試劑盒應用酶(mei)聯免(mian)疫(yi)競爭法測定標本中二核(he)苷(gan)酸(CpG)水平。用(yong)純(chun)化(hua)的二核(he)苷(gan)酸(suan)(CpG)抗體包被(bei)微孔板(ban),制(zhi)成固相抗體,往包(bao)被(bei)單抗(kang)的微孔中加(jia)入二核苷酸(CpG),和HRP標記(ji)的二核(he)苷(gan)酸(CpG)抗原,使它們(men)競爭結合(he),經過(guo)che底(di)洗滌后(hou)加底物TMB顯色。樣(yang)本顏色的深淺和樣(yang)品中的二(er)核苷酸(CpG)的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定(ding)吸光(guang)度(OD值(zhi)),通(tong)過標準(zhun)曲線計算(suan)樣品(pin)中二(er)核苷酸(CpG)的含量。
試劑盒組成
1 | 30倍(bei)濃縮洗(xi)滌液 | 20ml×1瓶 |
8 | 標準品S1(2400ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶標(biao)試劑 | 6ml×1瓶 | 標準品S2(1200ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶標(biao)包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3(600ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 顯色劑(ji)A液 | 6ml×1瓶(ping) | 標準品S4(300ng/L ) | 0.5ml×1瓶(ping) | |
5 | 顯(xian)色劑B液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5(150ng/L) | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 終止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 說明書(shu) | 1份 |
7 | 樣(yang)品稀釋液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
標本要(yao)求
1.標本處理:(1)水樣 采集后經 -20℃反復凍融三次,再經玻璃纖維過濾后,備查
(2)組織 樣品用丁醇(chun):甲(jia)醇(chun):水(5:25:70 V:V:V)抽提(ti),或按相(xiang)關文獻(xian)提(ti)取進行,提(ti)取后(hou)應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biao)本(ben)放于-20℃保存(cun),備查
2.不能檢測含NaN3的(de)樣品,因NaN3抑(yi)制辣根過(guo)氧化(hua)物酶的(de)(HRP)活(huo)性。
操作步驟(zou)
1. 加樣:分別設(she)標準孔(kong)、空(kong)白孔(kong)(空(kong)白對照孔(kong)不(bu)加樣品及(ji)酶(mei)標試劑,其余(yu)各步操作相同)、待測樣品孔。在(zai)酶標包被板上標準孔(kong)中(zhong)加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然(ran)后(hou)再加待測樣品(pin)10μl(樣品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋度(du)為(wei)5倍(bei))。加樣(yang)將樣(yang)品加于酶(mei)標板孔(kong)底部,盡(jin)量不觸(chu)及孔(kong)壁,輕輕晃動混勻。
2. 加酶(mei):每孔加入酶(mei)標試劑50μl,空白孔除外。
3. 溫育:用封板(ban)膜封板(ban)后(hou)置37℃溫育(yu)60分(fen)鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾水30倍稀釋(shi)后備用(yong)
5. 洗(xi)滌:小心(xin)揭掉封板膜,棄(qi)去液體(ti),甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此(ci)重(zhong)復(fu)5次(ci),拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯(xian)色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘.
7. 終(zhong)止(zhi):每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl,終(zhong)止反應(此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃色)。
8. 測(ce)定(ding):以空白孔(kong)調零,450nm波長依(yi)序測量各(ge)孔的吸光度(du)(OD值)。 測(ce)定應在加終止液后15分(fen)鐘以內進行。
計算
以標準物(wu)的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標(biao),在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準曲線(xian),根據樣品的(de)OD值由標準(zhun)曲線(xian)查出(chu)相應的濃(nong)度;再乘以稀(xi)釋(shi)倍數;或(huo)用標(biao)準物的濃度與OD值計算出標(biao)準曲線(xian)的直(zhi)線(xian)回歸(gui)方(fang)程(cheng)式,將(jiang)樣品的OD值代入方程式,計(ji)算出樣品濃度,再(zai)乘以稀釋(shi)倍數(shu),即為樣(yang)品的實(shi)際(ji)濃度(du)。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可(ke)能會有結晶(jing)析出,稀釋時可在水浴中(zhong)加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物(wu)質含量過高(gao)(樣本OD值大于標準品孔(kong)第一孔(kong)的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍(bei)數(n倍)后再測定,計算時(shi)請(qing)最后乘(cheng)以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜(mo)只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
檢測范圍:
50ng/L -2800ng/L
規格:
96份/盒
保存條(tiao)件及有效(xiao)期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月