在實(shi)際操作中(zhong)，凍(dong)存細(xi)胞要(yao)進行(xing)復(fu)蘇(su)，再培養(yang)傳代。凍(dong)存細(xi)胞應如何復(fu)蘇(su)呢？復(fu)蘇(su)細(xi)胞一般采(cai)用快速(su)(su)融(rong)化(hua)(hua)法。以保證細(xi)胞外結晶快速(su)(su)融(rong)化(hua)(hua)，以避免慢速(su)(su)融(rong)化(hua)(hua)水分滲入(ru)細(xi)胞內(nei)(nei)，再次形成(cheng)胞內(nei)(nei)結晶損傷細(xi)胞。

    細胞復蘇的主要操作步驟
   （1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
   （2）迅速放入 38℃水浴中，并不時搖動，在 1 分鐘內使其*融化，然后在無菌下取出細胞。         

   （3）在(zai) 1000r/min速度(du)下(xia)離心 5～10 分鐘，棄去(qu)上層液，加(jia)(jia)入(ru)適量(liang)培(pei)養(yang)(yang)(yang)液后接種于培(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶中(zhong)，接種濃度(du) 1×109/L，置 37℃溫箱靜置培(pei)養(yang)(yang)(yang)，次日 更換(huan)一次培(pei)養(yang)(yang)(yang)液，繼續培(pei)養(yang)(yang)(yang)，觀察生長情況。若細胞(bao)密度(du)較高，及(ji)時傳代(dai)。或無需離心直接將細胞(bao)加(jia)(jia)入(ru)瓶中(zhong)，并加(jia)(jia)入(ru)培(pei)養(yang)(yang)(yang)基貼壁(bi)培(pei)養(yang)(yang)(yang) 12～24 小(xiao)時 后，充(chong)去(qu)上清(qing)，換(huan)入(ru)新(xin)鮮培(pei)養(yang)(yang)(yang)基繼續培(pei)養(yang)(yang)(yang)。

    細胞復蘇的注意事項
在細胞復蘇操作時，應注意融化凍存細胞速度要快，可不時搖動安瓿或冷凍管，使之盡快通過易受損的溫度段（-5～0℃）。這樣復蘇的凍 存細胞存活率高，生長及形態良好。然而，由于凍存的細胞還受其他因素的影響，有時也會有部分細胞死亡。此時，可將不貼壁、飄浮在培養液上（已死亡）的細胞輕輕倒掉，再補以適量的新培養液，也會獲得較為滿意的結果。

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